О министерстве Документы Учреждения Новости Мероприятия Проекты ИКТ Оnline услуги

ПОРЯДОК ОЦЕНКИ БЕЗОПАСНОСТИ ДЛЯ ЖИЗНИ И ЗДОРОВЬЯ ЧЕЛОВЕКА ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ, ПОЛУЧЕННОЙ МЕТОДОМ ГЕННОЙ ИНЖЕНЕРИИ СанПиН РУз №0362-18 Главная

14 декабря 2018

ПОРЯДОК ОЦЕНКИ БЕЗОПАСНОСТИ ДЛЯ ЖИЗНИ И ЗДОРОВЬЯ ЧЕЛОВЕКА ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ, ПОЛУЧЕННОЙ МЕТОДОМ ГЕННОЙ ИНЖЕНЕРИИ СанПиН РУз №0362-18

САНИТАРНЫЕ НОРМЫ, ПРАВИЛА И ГИГИЕНИЧЕСКИЕ НОРМАТИВЫ РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН


ПОРЯДОК


ОЦЕНКИ БЕЗОПАСНОСТИ ДЛЯ ЖИЗНИ И ЗДОРОВЬЯ ЧЕЛОВЕКА


ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ,


ПОЛУЧЕННОЙ МЕТОДОМ ГЕННОЙ ИНЖЕНЕРИИ


СанПиН РУз №0362-18


Издание официальное


Ташкент-2018


САНИТАРНЫЕ НОРМЫ, ПРАВИЛА И ГИГИЕНИЧЕСКИЕ


НОРМАТИВЫ РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН

«УТВЕРЖДАЮ»

Главный Государственный

санитарный врач РУз

_______________ С.С. Саидалиев

« 06 » ноября 2018 г.


ОЦЕНКА БЕЗОПАСНОСТИ ДЛЯ ЖИЗНИ И ЗДОРОВЬЯ ЧЕЛОВЕКА

ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ,

ПОЛУЧЕННОЙ МЕТОДОМ ГЕННОЙ ИНЖЕНЕРИИ


СанПиН РУз № 0362-18


Ташкент - 2018


УЧРЕЖДЕНИЯ – РАЗРАБОТЧИКИ:


Главное управление санитарно-эпидемиологического надзора Министерства здравоохранения Республики Узбекистан. (ГУСЭН МЗ РУз), Республиканский Центр Государственного санитарно-эпидемиологического надзора, (РесЦГСЭН МЗ РУз), Ташкентская медицинская Академия (ТМА)/

СОСТАВИТЕЛИ:


Н.В.Шарипова - главный специалист ГУСЭН МЗ РУз


Б.И.Алматов - главный врач РесЦГСЭН МЗ РУз


А.С.Худайберганов - главный специалист МЗ РУз по гигиене питания, д.м.н.,


профессор


А.Н.Шукуров - заместитель главного врача РесЦГСЭН МЗ РУз, к.м.н.


О.Л.Элинская - врач-лаборант РесЦГСЭН МЗ РУз, к.м.н., с.н.с.


Э.Б.Наврузов - старший научный сотрудник ТМА, к.м.н.;


РЕЦЕНЗЕНТЫ:


Д.А.Зарединов - заведующий кафедрой гигиены ТашИУВ, д.м.н., про-фессор


Д.М. Хаширбаева - директор НИИ СГиПЗ МЗ РУз, д.м.н.


Ш.С.Бахриддинов - профессор кафедры гигиены питания, детей и под-ростков ТМА, д.м.н.


Настоящие санитарные нормы, правила и гигиенические нормативы (СанПиН) разработаны в рамках реализации Указа Президента Республики Узбекистан №5308 от 22 января 2018 г. «О государственной программе по реализации Стратегии действий по пяти приоритетным направлениям развития Республики Узбекистан в 2017—2021 годах в «Год поддержки активного предпринимательства, инновационных идей и технологий», рассмотрены и одобрены на заседании Комитета по регламентации потенциально неблагоприятных факторов окружающей человека среды при Министерстве здравоохранения Республики Узбекистан


Проведена правовая экспертиза Министерством юстиции Республики Узбекистан (письмо №6-15/31-18250/6 от « 05» ноября 2018 года).


С введением в действие настоящих СанПиН отменяется действие СанПиН РУз № 0185-05 «Требования к определению безопасности пищевой продукции, содержащей генетически модифицированные источники (ГМИ)».


Настоящие санитарные правила и нормы устанавливают единые требования к проведению оценки безопасности и риска возможных вредных воздействий продукции на организм чело-века, полученной методом генной инженерии.


СанПиН предназначен для специалистов уполномоченных органов в области контроля за без-опасностью пищевой продукции.


НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ


1. Закон Республики Узбекистан «О санитарно-эпидемиологическом бла-гополучии населения» от 26.08.2015 г.


2. Закон Республики Узбекистан «О качестве и безопасности пищевой продукции» от 30.08.1997 г.


3. Закон Республики Узбекистан «Об охране здоровья граждан» от 29.08.1996 г. с изменениями и дополнениями от 15.04.1999 г.


4. Закон Республики Узбекистан «О техническом регулировании» от 23 апреля 2009 г.


5. Закон Республики Узбекистан «Об оценке соответствии» от 4.10.2013 г.


6. Указ Президента Республики Узбекистан «О государственной про-грамме по реализации стратегии действий по пяти приоритетным направлени-ям развития Республики Узбекистан в 2018 — 2021 годах в «Год поддержки активного предпринимательства, инновационных идей и технологий»» №УП-5308 от 22.01.2018 г.

1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

1.1. Настоящие санитарные правила обеспечивают внедрение эффектив-ных механизмов контроля за безопасностью поступающих на потребительский рынок производимых и завозимых в республику продуктов питания и продо-вольственного сырья, полученных из и/или с использованием генной инжене-рии и устанавливают порядок оценки безопасности их для жизни и здоровья потребителей.


1.2. Требования, изложенные в санитарных правилах, применяются на этапах согласования ввоза на территорию страны или согласования проектов нормативных документов (стандартов) по производству продовольственного сырья и пищевой продукции, полученной методом генной инженерии.


ТЕРМИНЫ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ


По определению, применяемому Международной системой «Принципы надлежащей лабораторной практики (Good Laboratory Practice - GLP)», систе-ма обеспечения качества, имеющая отношение к процессам организации, пла-нирования, порядку проведения и контролю испытаний в области охраны здо-ровья человека и безопасности окружающей среды, а также оформления, архи-вирования и представления результатов этих испытаний, в настоящих санитар-ных правилах применяются следующие термины и определения:


- испытательный центр (testing center): фактическое место проведения неклинических испытаний, определяемые Министерством здравоохранения, где должны быть расположены коллектив специалистов, помещения и оборудова-ние, необходимые для их выполнения. Если испытание выполняют на несколь-ких испытательных площадках, а не в одном месте, то под термином «испыта-тельный центр» понимают центр, где должны быть расположены руководитель и исполнители испытаний, все испытательные площадки, по отдельности и все вместе рассматриваемые в качестве испытательного центра;


- спонсор (sponsor): физическое или юридическое лицо, которое иниции-рует исследования, оформляет заказ, поддерживает и/или утверждает проведе-ние неклинических исследований и несет ответственность за его организацию и финансирование;


- руководитель исследования (study chair): лицо, ответственное за прове-дение неклинического исследования в области медицинской и экологической безопасности от начала до конца;


- ответственный исследователь (principal investigator): лицо, которое, в случае проведения исследований на нескольких площадках, действует от имени руководителя исследования и несет ответственность за переданные в его ведение фазы исследования;


Примечание. Ответственному исследователю (ям) не может быть полностью передана от-ветственность руководителя исследования за проведение исследования, поскольку она включает в себя утверждение плана исследования и поправки к этому плану, утверждение заключительного отчета и гарантии, что все исследования соответствуют принципам надлежащей лабораторной практики.


- программа обеспечения качества (quality assurance program): про-грамма работ, выполняемых независимым от проведения исследований персо-налом и направленных на обеспечение администрацией испытательного центра соблюдения принципов надлежащей лабораторной практики;


- стандартные операционные процедуры: СОП (standard operating procedures - SOPs): подробные письменные инструкции, содержащие описание процессов проведения испытаний или другой деятельности, как правило, не представленных детально в планах исследования или руководствах по прове-дению испытаний, и предназначенные для достижения единообразия, при осу-ществлении определенной деятельности;


- основной план-график (master time schedule): график работ обобщаю-щего уровня, включающий в себя укрупненные этапы и ключевые события, т.е. сводку информации, позволяющую оценить рабочую нагрузку, используемую для контроля проведения исследований в испытательном центре;


- доклинические токсикологические исследования медицинской без-опасности (nonclinical toxicological studies of the health safety): эксперимент или ряд экспериментов, согласно которым объект испытаний подвергают ис-следованию в лабораторных, тепличных или полевых условиях, чтобы полу-чить данные о свойствах объекта и/или его безопасности и представить их на рассмотрение контролирующим органам;


- план исследования (study design): документ, описывающий цели и ме-тодологию эксперимента для проведения исследования и включающий в себя все внесенные в него поправки;


- поправка к плану исследования (amendment to study design): целена-правленное изменение в плане исследования, внесенное после начала его про-ведения;


- тест-система (test system): биологическая, химическая или физическая системы в отдельности или в комбинации, используемые в исследованиях;


- первичные данные исследования (raw data): оригиналы записей наблю-дения или препарированные гистоморфологические образцы органов, отра-жающие результаты наблюдений и исследований, проведенные во время иссле-дования;


Примечание. Первичными данными исследования могут быть: фотографии, микрофильмы, микропленки, их копии, дискеты и компакт-диски, рабочие записи, включая записи показаний ав-томатизированных приборов, и другие носители данных, которые обеспечивают безопасное хра-нение информации в течение срока действия разрешительного документа.


- образец (sample): любой материал, взятый из тест-системы для изуче-ния, анализа или хранения;


- дата начала эксперимента (experimental starting date): дата получения первых экспериментальных данных;


- дата окончания эксперимента (experimental completion date): дата по-лучения последних экспериментальных данных;


- дата начала исследования (study starting date): дата подписания руко-водителем исследования плана исследования;


- дата окончания исследования (study completion date): дата подписания руководителем исследования заключительного отчета;


- объект испытания, испытуемый или тестируемый объект (test item): объект, представляющий собой предмет исследования;


- стандартный объект (образец), контрольный объект (образец) (reference sample, control sample): объект (образец), используемый для сравне-ния с испытуемым объектом (образцом), имеющий официально (юридически) удостоверенный состав;


- партия, серия (batch, lot): определенное количество испытуемого или стандартного объекта, полученное в течение определенного производственного цикла таким способом, что этот объект имеет однородный характер;


- носитель (vehicle): вещество, используемое для смешивания, дисперги-рования или растворения тестируемого или стандартного объекта и позволя-ющее облегчить его введение в тест-систему.


- генетически модифицированные (генно-инженерные, трансгенные) организмы (далее - ГМО) - организм или несколько организмов, любое некле-точное, одноклеточное или многоклеточное образование, способные к воспро-изводству или передаче наследственного генетического материала, отличные от природных организмов, полученные с применением методов генной инженерии и (или) содержащие генно-инженерный материал, в том числе гены, их фраг-менты или комбинации генов;


- генная инженерия – совокупность приемов, методов и технологий, в том числе технологий получения рекомбинантных рибонуклеиновых (РНК) и дезоксирибонуклеиновых (ДНК) кислот, по выделению генов из организма;


- генная инженерная деятельность – деятельность, осуществляемая с использованием методов генной инженерии и генно-инженерно-модифицированных организмов;


2. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ


2.1. Настоящие санитарные правила разработаны с целью обеспечения


единого научно-обоснованного подхода к оценке безопасности пищевой продук-ции для жизни и здоровья человека, полученной методом генной инженерии на этапах разработки, экспертизы, регистрации и обращения.


3. ПРАВИЛА ОТБОРА


3.1. Отбор образцов продукции, полученной методом генной инженерии для их оценки безопасности, осуществляется в соответствии с требованиями действующей нормативно-технической документации Республики Узбекистан.


4. ПОРЯДОК ПРОВЕДЕНИЯ ОЦЕНКИ БЕЗОПАСНОСТИ


4.1. На первом этапе исследований в АИЛ ЦГСЭН или других учрежде-ний Министерства здравоохранения проводится оценка содержания ГМО в продукции методами ИСО 21569:2009, ИСО 21570:2009, ИСО 21571:2009, принятыми в Узбекистане.


4.2. При подтверждения наличии ГМО в продукции, по направлению главного Государственного санитарного врача Республики Узбекистан прово-дятся токсикологические исследования в испытательных лабораториях Мини-стерства здравоохранения, имеющих необходимые условия для проведения ис-следований в соответствии с настоящими санитарными правилами и аттесто-ванные в установленном порядке.


4.3. Содержание токсичных элементов, пестицидов, микотоксинов, анти-биотиков, аллергенов и других контаминантов в продукции, полученной мето-дом генной инженерии, не должно превышать предельно допустимые уровни, установленные санитарными нормами и правилами Республике Узбекистан.



5. ОЦЕНКА ВОЗМОЖНОГО ВРЕДНОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ

НА ОРГАНИЗМ В ЭКСПЕРИМЕНТАХ НА ЖИВОТНЫХ

5.1. Токсикологические исследования включают оценку физиолого-биохимических показателей крыс поколения F0 (на основании данных о динамике массы тела, об абсолютной и относительной массе внутренних органов; данных гематологических, морфологических и биохимических исследований, состояния антиоксидантного статуса и функционального состояния систем, осуществляющих защиту организма от воздействия токсичных соединений экзо- и эндогенного происхождения), а также изучение репродуктивной функции крыс поколения F0, пре- и постнатальное развитие потомства поколения F i.

Схема проведения эксперимента

Вид животных

Крысы беспородные (или линии Вистар)

Пол

Самцы, самки

Возраст

40 - 50 дней

Исходная масса тела

70-80 г

Количество животных

в группе в начале эксперимента

Не менее 80 особей в каждой группе: 55 самок, 25 самцов.

Все животные должны быть выбраны из пометов со сходной численностью и выживаемостью потомства.

При невозможности такой стандартизации количество животных в группах должно быть увеличено не менее чем в 2 раза: 110 самок, 50 самцов

Распределение по группам

Животных делят на 2 группы:

группа «контроль» получает рацион с включением традиционного аналога исследуемого ГМО;

группа «опыт» получает рацион с включением исследуемого продукта с ГМО (общее содержание ГМО в конечном рационе не должно превышать 10%)

Продолжительность эксперимента

Не менее 6 месяцев

Рацион

Пищевая и биологическая ценность рациона полностью удовлетворяет физиологические потребности животных

Карантин

Не менее 7 дней

Условия содержания

Животные получают свободный доступ к корму и воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом помещении

Отбор материала для гематологических, биохимических, морфологических исследований

У самцов поколения F0 не ранее чем на 100-й день эксперимента. Количество животных, взятых на исследование, должно составлять не менее 20 на группу

На протяжении эксперимента животные получают полусинтетический базовый рацион. Исследуемый ГМО и его традиционный аналог включают в состав корма в количестве, не нарушающем баланс основных пищевых веществ и не превышающем максимальный мировой допустимый уровень (10%). Замена ингредиентов рациона должна быть проведена с учетом содержания белков, жиров и углеводов во вводимом продукте при соблюдении принципа изокалорийности.

Состав базового рациона для экспериментальных животных

Ингредиент

Масса, г

Белок, г

Жир, г

Углеводы, г

Ккал

зерносмесь (комбикорм)

3,7

0,76

1,9

0,114

22,1

хлеб пшеничный, 2с

4

0,34

0,05

1,83

9,32

каша пшенная

(или смеси круп)

2,5

0,27

0,34

1,56

10,5

творог нежирный

2

0,36

0,012

0,036

1,76

рыбная мука

0,5

0,23

0,027

0

1,17

мясо 2 к

4

0,8

0,39

0

6,72

морковь

8

0,104

0,008

0,67

2,4

Зелень (салат)

8

0,12

0,016

0,25

1,36

Рыбий жир

0,1

0

0,099

0

0,9

дрожжи

0,1

0,05

0,01

0,083

NaCl

0,15

Итого

43,35

4,06

3,48

9,44

82,12

В случае исследования ГМО, полученного гибридизационным методом, в рационе лабораторных животных в качестве традиционного аналога используется продукция, полученная селекционным методом.

Исследуемые показатели

Интегральные показатели:

Изучаемые показатели

Периодичность сбора данных

Общее состояние животных (внешний вид, двигательная активность, состояние шерстного покрова)

Каждые 2 дня

Поедаемость корма

Ежедневно

Масса тела

Каждые 7 дней

Масса внутренних органов (головной мозг, сердце, селезенка, легкие, тимус, гипофиз, печень, почки, надпочечники, семенники)

На 30-й и 180-й дни эксперимента

Гематологические показатели

Изучаемые показатели

Периодичность

сбора данных

- концентрация гемоглобина;

- гематокрит;

- общее количество эритроцитов;

- средний объем эритроцита (СОЭ);

- среднее содержание гемоглобина в эритроците (ССЭ);

- средняя концентрация гемоглобина в эритроците (СКЭ);

- общее количество тромбоцитов;

- общее количество лейкоцитов;

- дифференцированный подсчет лейкоцитов (нейтрофилы, лимфоциты, эозинофилы, моноциты, базофилы)

На 30-й и 180-й дни эксперимента

Биохимические показатели

Общий биохимический анализ крови:

Изучаемые показатели

Периодичность сбора данных

- аланинаминотрансфераза (АЛТ);

- аспартатаминотрансфераза (ACT);

- желчные кислоты;

- фосфатаза щелочная;

- билирубин общий;

- билирубин прямой;

- белок общий;

- альбумин;

- глобулин;

- креатинин;

- глюкоза;

- альфа-амилаза;

- липаза;

- лактатдегидрогеназа;

- общие липиды;

- триглицериды;

- холестерин;

- холинэстераза;

- мочевина;

- хлориды;

- натрий;

- фосфор;

- калий

На 30-й и 180-й дни эксперимента

Общий анализ мочи

Материал для исследований: моча.

Изучаемые показатели

Периодичность сбора данных

- суточный диурез;

- цвет и прозрачность;

- относительная плотность;

- pH;

- белок;

- глюкоза;

- креатинин

На 30-й и 180-й дни эксперимента

Системные биомаркеры

Система антиоксидантной защиты :

Изучаемые показатели

Периодичность сбора данных

Активность ферментов антиоксидантной защиты.

Материал для исследований: эритроциты

- глутатионредуктаза;

- глутатионпероксидаза;

- супероксиддисмутаза;

- каталаза

На 30-й и 180-й дни эксперимента

Содержание продуктов перекисного окисления липидов.

Материал для исследований: кровь, печень

- малоновый диальдегид

Система ферментов метаболизма ксенобиотиков

Материал для исследований : печень.

Изучаемые показатели

Периодичность сбора данных

Активность ферментов 1-й и 2-й фазы метаболизма ксенобиотиков

- общее содержание цитохрома Р-450;

- 7-этоксирезоруфин-О-деэтилаза;

- 7-пентоксирезоруфин-О-деэтилаза;

- UDP-глюкуронозилтрансфераза;

- глутатионтрансфераза

На 30-й и 180-й дни эксперимента

Система регуляции апоптоза

1) Стабильность мембран лизосом.

Материал для исследований : печень.

Изучаемые показатели

Периодичность сбора данных

Общая и неседиментируемая активность ферментов лизосом

- β-галактозидаза;

- β-глюкуронидаза;

- арилсульфатазы А и В

На 30-й и 180-й дни эксперимента

Морфологические исследования

Исследуемые органы

Методы исследований

- кожа;

- головной мозг;

- сердце;

- аорта;

- селезенка;

- легкие;

- лимфатические узлы;

- тимус;

- щитовидная железа;

- гипофиз;

- ЖКТ: желудок, тонкая и толстая - кишки;

- печень;

- поджелудочная железа;

- почки;

- семенники

На 30-й и 180-й дни эксперимента (плановый забор)

1. Макроскопические исследования

2. Микроскопические исследования:

а) обзорные гистологические исследования

3. Морфометрический анализ

Вскрытие погибших в течение эксперимента животных (внеплановый забор)

1. Макроскопические исследования

2. Микроскопические исследования (перечень исследуемых органов может быть сокращен до минимально необходимого для установления причины смерти):

а) обзорные гистологические исследования

Дополнительные исследования

1. Микроскопические исследования:

а) гистохимические исследования;

б) иммуногистохимические исследования клеточных популяций и их производных.

2. Электронно-микроскопические исследования

Иммунологические исследования

Иммунологические исследования ГМО проводятся в эксперименте на мышах и включают изучение его иммуномодулирующих и сенсибилизирующих свойств по четырем тестам:

1) действие на гуморальное звено иммунитета - в тесте определения уровня гемагглютининов к эритроцитам барана;

2) действие на клеточное звено иммунитета - в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к эритроцитам барана;

3) действие как сенсибилизирующего агента - в тесте чувствительности к гистамину;

4) действие на естественную резистентность мышей к Salmonella typhimurium (сальмонеллы мышиного тифа).

Схема проведения эксперимента

Вид животных

Мыши

Пол

Самцы

Возраст

Половозрелые

Исходная масса тела

18 - 20 г

Распределение по группам

Животных каждой линии делят на 2 группы:

группа «контроль» получает рацион с включением традиционного аналога исследуемого ГМО;

группа «опыт» получает рацион с включением исследуемого ГМО

Рацион

Пищевая и биологическая ценность рациона полностью удовлетворяет физиологические потребности животных (базовый полусинтетический рацион)

Карантин

не менее 7 дней

Условия содержания

Животные получают свободный доступ к корму и воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом помещении

Исследования начинают через 21 день с момента перевода мышей на экспериментальные рационы. В течение эксперимента ведутся наблюдения за поедаемостью корма и общим состоянием животных.

Исследуемые показатели

1) Действие ГМО на гуморальное звено иммунитета.

Через 21 день эксперимента мышам контрольной (не менее 20 животных) и опытной (не менее 20 животных) групп обеих линий внутрибрюшинно вводят 0,5 мл эритроцитов барана (20 млн клеток/мл). Забор крови для исследований проводится на 7-й, 14-й, 21-й и 36-й день после введения эритроцитов барана. Сыворотку крови титруют в реакции гемагглютинации общепринятым методом. Полученные данные обрабатывают методами вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента. Результаты приводятся в видеМ ± m, где М - выборочное среднее измеряемых величин, m - стандартная ошибка.

2) Действие ГМО на клеточное звено иммунитета.

Через 36 дней эксперимента мышам контрольной (не менее 15 животных) и опытной (не менее 15 животных) групп обеих линий подкожно в межлопаточную область вводят 0,5 мл эритроцитов барана (2 млн клеток/мл). Через пять дней всем мышам в подушечку одной задней лапы вводят разрешающую дозу эритроцитов барана - 0,02 мл (1 млрд клеток/мышь); в контрлатеральную лапу - 0,02 мл 0,95 %-го раствора хлорида натрия. Местную воспалительную реакцию оценивают через 18 - 20 ч путем определения массы опытной и контрольной лапок. Интенсивность местной реакции определяют по индексу реакции (ИР).

3) Действие ГМО как сенсибилизирующего агента к гистамину.

Через 21 день эксперимента мышам контрольной (не менее 15 животных) и опытной (не менее 15 животных) групп обеих линий внутрибрюшинно вводят гистамин гидрохлорид (2,5 мг/мышь в 0,5 мл физиологического раствора). Реакцию учитывают через 24 ч по проценту гибели мышей.

4) Действие ГМО на естественную резистентность мышей к S. typhimurium изучают на модели внутрибрюшинного заражения мышей десятикратно отличающимися дозами S. typhimurium штамм 415. Через 21 день эксперимента мышей контрольной (не менее 30 животных) и опытной (не менее 30 животных) групп обеих линий заражают тремя дозами культуры: 1000, 100, 10 микробных клеток/мышь. После заражения за животными наблюдают в течение 21 дня. Вычисляют ЛД50, а также процент гибели животных по каждой дозе, затем проводят сравнительный анализ результатов.

Аллергологические исследования

Аллергологические исследования ГМО проводятся в эксперименте на лабораторных животных: потенциальную аллергенность оценивают, определяя тяжесть протекания системной анафилаксии и уровня циркулирующих сенсибилизирующих антител (субклассов IgG1 + IgG4) у крыс, получающих в составе рациона исследуемый ГМО (группа «опыт») и его традиционный аналог (группа «контроль»). Метод основан на количественной сравнительной оценке тяжести реакции системной анафилаксии, возникающей при внутрибрюшинной (в/б) сенсибилизации взрослых крыс пищевым антигеном - овальбумином куриного яйца (ОВА) - с последующим внутривенным (в/в) введением сенсибилизированным животным разрешающей дозы того же белка.

Схема проведения эксперимента

Вид животных

Крысы

Пол

Самцы

Возраст

Половозрелые

Исходная масса тела

150 - 180 г

Количество животных в группе в начале эксперимента

Не менее 25 особей в каждой группе

Распределение по группам

Животных делят на 2 группы:

группа «контроль» получает рацион с включением традиционного аналога исследуемого ГМО;

группа «опыт» получает рацион с включением исследуемого ГМО

Рацион (базовый)

Пищевая и биологическая ценность рациона полностью удовлетворяет физиологические потребности животных. Рацион не содержит яичного белка

Карантин

Не менее 7 дней

Условия содержания

Животные получают свободный доступ к корму и воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом помещении

Продолжительность эксперимента

29 дней

Забор материала для исследований

На 29-й день эксперимента

Исследуемые показатели

На 1-й, 3-й, 5-й день опыта крыс в/б сенсибилизируют ОБА, а на 21-й день эксперимента вводят дополнительную («бустерную») дозу антигена, уменьшенную в 10 раз в сравнении с первоначальной. Кормление рационами продолжают до утра 29-го дня эксперимента и затем вводят раствор ОБА в/в, после чего оценивают на протяжении 24 ч тяжесть развивающейся реакции анафилаксии по показателям числа летальных реакций, общего числа судорожных реакций и величины анафилактического индекса. Непосредственно перед введением разрешающей дозы у крыс отбирают 0,1 - 0,2 мл крови из хвостовой вены для определения уровня специфических антител.

Иммуноферментное определение уровней циркулирующих специфических антител к ОВА проводят согласно [3]. Статистическую обработку результатов проводят согласно U-критерию Фишера для долевых показателей, непараметрическим критериям хи-квадрат и Мана-Уитни с использованием пакетов программ Excel и SPSS 11.5.

Генотоксикологические исследования

Генотоксикологические исследования ГМО проводятся в эксперименте на лабораторных животных. Оценка потенциальной генотоксичности ГМО включает выявление повреждений ДНК и выявление мутагенной активности в эксперименте in vivo. Метод выявления мутагенной активности основан на учете хромосомных аберраций в метафазных клетках пролиферирующих тканей. Регистрация повреждений ДНК предусматривает оценку целостности структуры ДНК методом щелочного гель-электрофореза изолированных клеток (метод ДНК-комет).

Схема проведения эксперимента

Вид животных

Пол

Самцы

Возраст

Половозрелые

Исходная масса тела

18 - 20 г

Количество животных в группе в начале эксперимента

Не менее 15 особей в каждой группе

Распределение по группам

Животных делят на 2 группы:

группа «контроль» получает рацион с включением традиционного аналога исследуемого ГМО;

группа «опыт» получает рацион с включением исследуемого ГМО

Рацион(базовый)

Пищевая и биологическая ценность рациона полностью удовлетворяет физиологические потребности животных

Карантин

Не менее 7 дней

Условия содержания

Животные получают свободный доступ к корму и воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом помещении.

Продолжительность эксперимента

180 дней

Забор материала для исследований

На 30-й и 180-й день эксперимента

Исследуемые показатели

1) в основе метода выявления мутагенной активности лежит регистрация видимых структурных нарушений хромосом в клетках костного мозга на стадии метафазы. Анализируют 100 метафаз от каждого животного. Учитывают число одиночных и парных фрагментов, хроматидных и хромосомных обменов, ахроматических пробелов (гепов) и разрывов по центромере, число клеток с множественными повреждениями и клеток с полной деструкцией хромосом. Оценку результатов цитогенетического анализа проводят путем сопоставления долей клеток с хромосомными аберрациями в контрольной и опытной группах;

2) регистрация повреждений ДНК предусматривает оценку целостности структуры ДНК методом щелочного гель-электрофореза изолированных клеток (метод ДНК-комет). Метод основан на регистрации различной подвижности ДНК и возможных фрагментов ДНК лизированных клеток, заключенных в агарозный гель, в постоянном электрическом поле. При этом ДНК мигрирует к аноду, формируя электрофоретический след, напоминающий «хвост кометы», параметры которого зависят от степени поврежденности исследуемой ДНК. Общая схема метода включает получение гель-слайдов (подложки), получение микропрепаратов, лизис, щелочную денатурацию, электрофорез, нейтрализацию/фиксацию, окрашивание и микроскопический анализ.

Микроскопический анализ проводят на эпифлуоресцентном микроскопе с соответствующими для конкретного красителя фильтрами при увеличении 200× - 400×. На каждый микропрепарат анализируют не менее 100 «ДНК-комет». Анализ «ДНК-комет» может проводиться визуально или с помощью программно-аппаратного комплекса.

Исследования репродуктивной токсичности

Исследования репродуктивной токсичности ГМО проводятся в эксперименте на лабораторных животных и включают:

1) изучение влияния на генеративную функцию;

2) изучение эмбриотоксического и тератогенного действий, регистрируемых в пренатальном и постнатальном периодах развития.

Схема проведения эксперимента

Вид животных

Крысы

Пол

Самцы, самки

Возраст

40 - 50 дней

Исходная масса тела

70 - 80 г

Количество животных в группе в начале эксперимента

не менее 50 особей в каждой группе: 30 самок, 20 самцов

Распределение по группам

Животных делят на 2 группы:

группа «контроль» получает рацион с включением традиционного аналога исследуемого ГМО;

группа «опыт» получает рацион с включением исследуемого ГМО

Рацион (базовый)

Пищевая и биологическая ценность рациона полностью удовлетворяет физиологические потребности животных

Карантин

Не менее 7 дней

Начало опытного вскармливания

За 45 - 50 дней перед первым спариванием

Условия содержания

Животные получают свободный доступ к корму и воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом помещении

Исследуемые показатели

Интегральные показатели:

Изучаемые показатели

Периодичность сбора данных

Общее состояние животных (внешний вид, двигательная активность, состояние шерстного покрова)

каждые 2 дня

Поедаемость корма

Ежедневно

Масса тела

каждые 7 дней

Показатели, характеризующие генеративную функцию .

Изучаемые показатели

Сроки сбора данных

Морфологические исследования семенников (определяют индекс сперматогенеза, среднее количество нормальных сперматогоний в каждом канальце, относительное количество канальцев с 12-й стадией мейоза)

половозрелые особи

Морфологические исследования яичников (примордиальные фолликулы, фолликулы с двумя и более слоями фолликулярных клеток, третичные фолликулы, атретические тела, желтые тела, общее количество генеративных форм)

Показатели, характеризующие пренатальное развитие потомства.

Изучаемые показатели

Сроки сбора данных

1. Забой и вскрытие не менее 7 беременных самок на группу

19 - 20-й день беременности

2. Визуальное исследование матки, плаценты, плодов: выявление живых и мертвых плодов, подсчет количества желтых тел, мест имплантации, количество резорбций по правому и левому рогу матки (с последующим вычислением пред- и постимплантационной эмбриональной смертности)

3. Анализ эмбрионального материала (не менее 5 плодов от каждой крысы)

Показатели, характеризующие постнатальное развитие потомства.

Изучаемые показатели

Сроки сбора данных

1. Контроль рождения потомства

20 - 22-й дни беременности

2. Учет величины помета в день родов, подсчет количества живых и мертвых крысят, подсчет особей разного пола, установление внешних уродств, измерение массы тела, определение краниокаудального размера

1-й день жизни

3. Учет показателей физиологического развития крысят: срок отлипания ушных раковин, появление первичного волосяного покрова, прорезывание резцов, открытие глаз, опускание семенников, открытие влагалища; выживаемость потомства

1 - 30 дни жизни

4. Измерение массы тела и роста крысят

1, 4, 7, 14, 21 и 25 дни жизни

11. ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

11.1. Все павшие животные, а также животные, забитые после окончания введения исследуемых образцов продукции подвергаются вскрытию для патоморфологических и гистологических исследований специалистами морфологами и гистологами.

11.2. Необходимые макроскопические, микроскопические, гематологические и биохимические исследования проводятся во всех группах животных при забое, методики которых подробно описаны в специальных руководствах.

11.3.Является обязательным хранения гистологических препаратов в виде микроскопических срезов внутренних органов в лаборатории проводивших токсикологические исследования в течении 5 лет.

14. ОСНОВНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ К ВИВАРИЮ

14.1. Виварий должен обеспечивать нормальную жизнедеятельность ла-бораторных животных.


14.2. Проведение работ с лабораторными животными на высоком уровне может быть обеспечено при реализации следующего ориентировочного плани-рования помещений: административные помещения, зона приема животных, техническая, служебная и асептическая зоны.


14.3. Содержание лабораторных животных должно предусматривать максимальное обеспечение их физиологического состояния и учитывать совре-менные требования к параметрам микроклимата, режиму освещения, площади размещения и конструкции клеток и боксов.


Примечание. Помещения для содержания животных должны быть светлыми, с хорошей приточно-вытяжной вентиляцией, с постоянной температурой и влажностью воздуха, которые обеспечиваются кондиционированием воздуха по системе «зима-лето». В помещениях по об-служиванию и содержанию животных температура воздуха обеспечивается в пределах: 20-26°C - для крыс и морских свинок, 16-22°C - для кроликов; относительная влажность воздуха в пределах 30-70%.


14.5. Следует исключить отрицательное воздействие на здоровье живот-ных нарушений санитарного состояния и больных из числа обслуживающего персонала.


14.6. В помещениях для содержания животных запрещается проведение каких-либо манипуляций с животными, использование моющих средств, инсек-тицидов и других химических веществ, способных повлиять на здоровье лабо-раторных животных.


14.7. Клетки для содержания животных должны быть комфортабельны-ми, обеспечивать необходимое пространство для свободного передвижения, просты в раздаче корма и воды, обеспечивать сухое и чистое содержание жи-вотных, легко очищаться, быть устойчивыми к стерилизации. Необходимо обеспечить постоянный санитарный контроль.


Примечание. Для грызунов подстилка должна меняться 1-3 раза в неделю, для крупных животных ежедневно. Клетки и другой инвентарь подлежат стерилизации до размещения жи-вотных. Клетки с ее принадлежностями меняют 1-2 раза в неделю, стеллаж - 1 раз в неделю. Подстилка в клетках должна обладать хорошей гигроскопичностью, не содержать вредных ве-ществ.


14.8. Необходимо проводить плановые мероприятия по борьбе с насеко-мыми и дикими грызунами методами, которые не оказывают отрицательное влияние на последующий эксперимент.


14.10. Поилки в клетках должны гарантировать постоянное снабжение животных водой, соответствующей требованиям O’zDSt 950:2011 «Вода пить-евая».


14.11. При проведении токсикологических исследований с использовани-ем экспериментальных животных должны соблюдаться правила биоэтики.

15. СОСТАВЛЕНИЕ ЗАКЛЮЧИТЕЛЬНОГО ОТЧЕТА

15.1. Структура заключительного отчета включает следующие разделы: введение, материалы и методы, результаты и их обсуждение, заключение.


15.2. В заключительном отчете должны быть отражены следующие пунк-ты:


- наименование и адрес учреждения-исполнителя;


- дата начала и окончания исследований;


- цель исследований;


- статистические методы обработки данных;


- характеристика испытуемого образца продукции полученной методом генной инженерии;


- характеристика испытуемого образца в условиях введения животным;


- полная характеристика использованных лабораторных животных (вид, линия, происхождение, возраст, общее количество, порядок идентификации особей);


- изучение дозы, частота введения, продолжительность и путь введения;


- факторы окружающей среды и условия содержания животных;


- полученные результаты исследований, их обсуждение и заключение;


- фамилия, имя, отчество и подпись руководителя и исполнителей.


15.3. Заключительный отчет должен быть написан грамотно и аккуратно оформлен. Заключение должно быть утверждено руководителем учреждения, в котором проводились токсикологические исследования.


15.4. Срок хранения документации – в течении 5 лет.


Отчет по результатам исследований токсичности и аллергенности ГМО оформляется в виде отчета в соответствии с требованиями Межгосударственно-го стандарта ГОСТ 7.32-2001 и должен включать цифровые данные в форме таблиц, содержащих основные сведения, необходимые для суждения о наличии или отсутствии у исследуемого ГМО неблагоприятного действия на живые организмы.

Список литературы


1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. Руководство. М.: Медицина, 1990. 384 с.


2. Ведомости Фармакологического комитета. 1999. № 1. С. 31 - 36.


3. Гмошинский И.В., Кржечковская В.В., Пятницкий Н.Н. // Вопросы пита-ния. 1994. № 1 - 2. С. 30 - 33.


4. Гурова Н.В., Попело И.А., Сучков В.В. // Мясная индустрия. 1999. Т. 1. С. 23 - 25.


5. Гурова Н.В., Токаев Э.С., Гуров А.Н. Метод определения эмульсионных свойств белков. М.: Сб. АгроНИИТЭИ Мясомолпром, 1994.


6. Дингл Дж. Лизосомы. Методы исследования. М.: Мир, 1980. 344 с.


7. Западнюк И.П. и др. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте. 3-е изд. Киев: Высш. школа, 1983. 383 с.


8. Иммуномодулирование. Сборник трудов. М., 1987. С. 3 - 25.


9. Киселева А.Ф. и др. Морфофункциональные методы исследования в норме и при патологии. К.: Здоровья, 1983. 163 с.


10. Костюк В.А., Потапович АЛ // Вопр. мед. химии. 1987. № 3. С. 115 - 118.


11. Лабораторная иммунология. Лабораторные методы исследования в не-инфекционной иммунологии. М.: Медицина, 1967. 356 с.


12. Лакин Г.Ф. Биометрия: Учеб, пособие для биол. спец, вузов 4-е изд., пе-рераб. и доп. М.: Высш. шк., 1990. 352 с.


13. Лойда З., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы. М.: Мир, 1982. 272 с.


14. Луппа X. Основы гистохимии. М.: Мир, 1980. 343 с.


15. Мальцев Г.Ю., Васильев А.В. // Вопр. мед. химии. 1994. № 2. С. 56 - 58.


16. Мальцев Г.Ю., Орлова Л.А // Вопр. мед. химии. 1994. № 2. С. 59 - 61.


17. Меньшиков В.В. (Ред.) Лабораторные методы исследования в клинике. М.: Медицина, 1987. 368 с.


18. Метод определения критической концентрации термотропного гелеобра-зования. В кн.: Материалы III Международной научно-технической конферен-ции «Пища. Экология. Человек». М., 1999. Т. 1. С. 40.


19. Микроскопическая техника: Руководство / Под ред. Саркисова Д.С., Пе-рова Ю.Л. М.: Медицина, 1996. 544 с.


20. Ноздрачёв А.Д., Поляков Е.Л. Анатомия крысы. С.-Пб.: «Лань», 2001. 464 с.


21. Пальцев М.А., Аничков Н.М. Патологическая анатомия. В 2-х т. М.: Ме-дицина, 2000. 1944 с.


22. Полак Д., Норден С.В. Введение в иммуноцитохимию: современные ме-тоды и проблемы. М.: Мир, 1987. 74 с.


23. Применение метода щелочного гель-электрофореза изолированных кле-ток для оценки генотоксических свойств природных и синтетических соедине-ний: Методические рекомендации. М., 2006. 27 с.


24. Руководство по методам исследования, химико-технологическому кон-тролю и учету производства в масло-жировой промышленности / Под ред. Ржехина В.П., Сергеева А.Г. Л.: ВНИИЖ, 1967. Т. 1. 1050 с.


25. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению но-вых фармакологических веществ /Под редакцией Хабриева Р.У. 2-е изд., пере-раб. и доп. М.: «Медицина», 2005. 832 с.


26. Струков А.И., Серов В.В. Патологическая анатомия. М.: Медицина, 1993. 688 с.


27. Burchell В., Weatherill Р. // Methods Enzymol. 1981. Vol. 77. Р. 169 - 176.


28. Burke M.D., Mayer R.T. // Chem.-Biol. Interact. 1983. Vol. 45. P. 243 - 258.


29. Codex Alimentarius. Foods derived from biotechnology. Rome: FAO/WHO, 2004. 51 p.


30. Codex Alimentarius. Food hygiene basic texts. Third edition. Rome: FAO/WHO, 2003. 68 p.


31. Ernster L., Nordenbrandt K. // in Methods in Enzymology. Oxidation and phosphorilation. Estabrook R.W., Pullman M.E., eds., Ac. Press N.Y., 1967. Vol. 10. P. 574 - 580.


32. Habig W.H., Pabst M.J., Jacoby W.B. // J. Biol. Chem. 1974. Vol. 294. P. 7130 - 7139.


33. Michara M., Uchiyama M., Fukuzawa K. // Biochem. Med. 1980. Vol. 23. P. 302 - 311.


34. Mills G.C. // J. Biol. Chem. 1959. Vol. 234. № 3. P. 502 - 506.


35. Niashikimi M., Rao N., Jagi K. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1972. Vol. 46. P. 849 - 854.


36. OECD (Organisation for Economic Cooperation and Development). Report of the Task Force for the Safety of Novel Foods and Feeds for the G8 Summit (Okinawa). Paris: OECD, 2000. C(2000)86/ADD1.


37. Omura T., Sato R. // Biol. Chem. 1964. Vol. 239. P. 2370 - 2378.


38. Oshino N., Chance B. //Arch, of Biochem. and Biophys. 1973. Vol. 154. № 1. P. 117 - 131.


39. Preston N.W. // Path. Bact. 1959. Vol. 78. № 1. P. 217 - 224.


40. Stokes C.R., Miller B.G., Bourne F.J. Animal models of food sensitivity // Food allergy and intolerance. London et. al., 1987. P. 286 - 300.


41. Tillotson J.A., Sauberlich H.E. // J. Nutrition. 1971. Vol. 101. P. 1459 - 1466.


42. Umegaki K., Saito K., Kubota Y. et al. // Jpn.J. Pharmacol. 2002. Vol. 90. P. 345 - 351.


43. Weigle W., Cochrane C., Dixon F. // J. Immunology. 1960. Vol. 85. P. 469 - 477.


44. Weingand K., Brown G., Hall R., et al. // Fundamental and applied toxicolo-gy. 1996. Vol. 29. P. 198 - 201.


45. WHO/FAO. Report of a Joint FAO/WHO Expert Consultation on foods de-rived from biotechnology: Safety aspects of genetically modified foods of plant origin. WHO: 2000. 35 p.


46. WHO/FAO. Report of a Joint FAO/WHO Expert Consultation on Allergenic-ity of foods derived from biotechnology: Evaluation of Allergenicity of genetically modified foods. WHO: 2001. 27 p.


47. Методические указания МУК 2.3.2.970-00. Медико-биологическая оцен-ка пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источ-ников. Москва, 2000. – 95с.


48. Методические указания МУ 2.3.2.2306-07. Медико-биологическая оценка генно-инженерно- модифицированных организмов растительного происхожде-ния. Москва, 2007. – 18 с.


49. Методические указания МУ 2.3.2.3388-16. Медико-биологическая оценка генно-инженерно-модифицированных организмов растительного происхожде-ния с комбинированными признаками. Москва, 2016. – 34 с.


Тип документа:  СанПиН
Номер документа:  0362-18
Дата принятия:  06.11.2018
Сохранить в формате pdf |